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「大台南發展歷史背景」展區，透過歷史文化背景與典藏文物的關係，娓娓道來文化古都臺南的發展故事；其中最吸睛的文物當屬近期最熱門的古蹟創意商品「鄭成功洋芋片」的原件《鄭成功畫像（那須豐慶摹本）》，以及鄭成功親筆揮灑的書法作品《鄭成功草書》。
文化局指出，這兩件鎮館之寶係市府委託台南藝術大學博物館學與古物修復研究所歷時兩年修復完成後首次公開在世人面前，就歷史意義來講，具有準國寶級的地位，能夠近距離看到，機會非常難得。
「典藏瑰寶」展區則展出由文物館典藏、《文化資產保存法》指定有案的「一般古物」，包括《玉板（傳寧靖王玉笏）》、《葫蘆埤中島石碑及石座》、《清代林朝英書法木刻》、《清代吏治箴言匾》以及《臺灣縣蘇孝銘佾生執照》。
「典藏文物」則以各式各樣的特色文物為主，舉凡陶器、木雕、碑銘、匾額、印契、錢幣等各式文物，內容涵蓋史前生物、先民遺跡、晚近生活器物等，古今風貌盡在其中，展現文物館豐碩的典藏。
「文化資產與文物修復」則主要展出近年來館藏透過文物調查研究與修復的成果，包括紙質與木質文物的修復工具與文物修復過程資料，讓大眾認識到文物修復除需要專業的技術，更仰賴修復師們的細心與耐心，才能完成繁複精細的修復工作，使文物妙手回春。
